鸡胚绒毛毛尿囊膜结构与眼结膜相似，绒毛尿囊膜血管实验( Chorioallantoic membrane vascular assay，CAMVA) 方法通过观察受试物对血管的作用评价潜在的眼刺激性，具有较高的敏感性。

通过检测化学物对CAM 的损伤并量化为半数反应浓度( Median reactive concentration，ＲC50) 来评价其眼刺激性。CAMVA对于检测中度以下的眼刺激性效果较好，尤其是能有效区分无刺激性物质。其缺点对重度刺激的物质无法精确区分。因此，CAMVA 方法非常适确定化妆品原料在面膜或眼部产品中的适用浓度。也适用于检验面膜或眼膜的眼部刺激性。

实验方法：受精鸡卵在( 37. 5 ± 0. 5) ℃，相对湿度为70%的条件下进行孵育。于第4天在鸡胚窄端钻一小孔，抽取约2-4 mL 蛋清。在鸡胚位置的上方开约2 cm2 的窗口，用保鲜膜覆盖。随后放入恒温恒湿箱继续孵育。第10 天，取出鸡胚，剥去窗口周围的蛋壳，选取生长良好的鸡胚用于实验。

预实验以每组2 ～ 3 个鸡胚找出全部反应和全部不反应的浓度。反应分为血管充血、出血、凝血都是有反应。

实验鸡胚数每组一般不少于10 只。一般在预实验得到的2 个剂量组之间拟出4 个浓度组进行测试。根据结果用Bliss方法计算得到RC50（半数反应浓度）、RC5（5%反应浓度）、RC95（95%反应浓度）。其中RC50代表一个原料的眼刺激性大小，浓度越大越安全；另外，一般地可认为，RC5为某原料在眼部产品中能接受的浓度。当然要求严格的话，可以参考RC1。

影响鸡胚实验的因素很多，我们前期做了大量工作减少各种系统误差。下布公布一些初步实验的结果，供大家参考：

阳性对照物：十二烷基磺酸钠（SDS,分析纯）

RC50 = 0.0375，RC50(Feiller校正)95%的可信限 = 0.0275-0.0492，RC5 = 0.0103，RC95 = 0.136。

此数据与上海市疾病预防控制中心王宁所测（0.03%）基本相符。见文献"王宁.鸡胚绒毛尿囊膜血管试验在化妆品安全性评价中的应用研究[J].现代预防医学，2016, 43 (22)，4163 - 4165"。

原料1：1 , 2 - 丙二醇（分析纯）

半数致死量 RC50 = 8.34，RC50 95%的可信限 = 7.47 - 9.19，RC5 = 5.55 ，RC95 = 12.5。根据实验，眼膜产品中丙二醇的加入量低于5.5%。

原料2：甘油（意慕利）

RC50 = 4.19，RC50 95%的可信限 = 3.59- 4.75，RC5 = 2.63，RC95 = 6.67。可见甘油对眼刺激性比丙二醇更强，与我们预期不太相同。不过上面数据甘油是化妆品级，丙二醇是分析纯，也不能直接对比。另外，CAMVA方法主要反映眼部刺激，所以得到的数据也是对眼部刺激参考，而不是从毒性来考虑的。

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